1. <p id="o6a8g"><tr id="o6a8g"><label id="o6a8g"></label></tr></p>

    1. <td id="o6a8g"><tr id="o6a8g"><label id="o6a8g"></label></tr></td>
      <td id="o6a8g"><tr id="o6a8g"><th id="o6a8g"></th></tr></td>

      <small id="o6a8g"><dl id="o6a8g"><small id="o6a8g"></small></dl></small>

        1. 久久精品伊人_国产精自产拍久久久久久_亚洲天堂成人av_亚洲第一网色综合久久红第一_来一水AV@lysav

          產(chǎn)品中心PRODUCTS CENTER
          技術文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術文章 > ibidi µ-Slide VI 0.4 免疫熒光實驗,四步簡單操作,小白也輕松上手!

          ibidi µ-Slide VI 0.4 免疫熒光實驗,四步簡單操作,小白也輕松上手!

          更新時間:2023-07-10   更新時間:2023-07-10   點擊次數(shù):1207次

            免疫熒光技術是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。本文將介紹免疫熒光實驗的新方法;此文將描述在通道載玻片內培養(yǎng)大鼠成纖維細胞(Rat1)的單個實驗案例。然后再用AlexaFluor®488鬼筆環(huán)肽染色F-肌動蛋白細胞骨架,并用DAPI對細胞核進行復染。  

            

          58e9b15026fa1994f07e32cd074a6857.jpg

            

            細胞免疫熒光實驗包括四個主要步驟:

            

          7f8da2af79d0c2475ba6545ac4c2b9df.png

             

            1、培養(yǎng)

            

            • 在無菌條件下打開 μ-Slide VI 0.4、ibiTreat (80606) 的包裝,并將其放在 μ-Slide 架 (80003) 上。

            

            • 在每個通道中加入 30 μl 3x105細胞/ml 大鼠成纖維細胞(Rat1)細胞懸液。如下圖所示或我們的網(wǎng)站上所示,直接將移液器加入通道。  

            

          df5e836459a27d19c63ba9601a36ea96.png

            

            • 用隨附的蓋子蓋住。

            

            • 將載玻片放入培養(yǎng)箱 (37 °C; 5% CO2) 培養(yǎng)并讓細胞附著 (60 分鐘)。然后用 60 μl 無細胞培養(yǎng)基填充兩個通道口。

            

            • 孵育過夜。

            

            2、固定和透化

            

            在固定和透化過程中要小心,通道永遠不要變干!通過用下一個沖洗剩余的溶液來交換通道中的液體

            

            固定:

            

            • 使用細胞培養(yǎng)抽吸裝置從所有通道口中吸出培養(yǎng)基。用 Dulbecco PBS 洗滌細胞,方法是將 200 μl 緩慢加入每個通道的一個空通道口,并從每個通道的相對通道口吸出。不要吸出整個通道體積。

            

            • 用約 100 μl 3.7% 多聚甲醛的 PBS 固定細胞。20 分鐘后,通過用 200 μl PBS 填充一孔并從另一孔中吸出來沖洗通道內的液體;確保通道-不干涸。

            

            透化和封閉:

            

            • 如上所述,用 200 μl PBS 再次洗滌細胞。

            

            • 在 PBS 中用 ~100 μl 0.1% Triton® X-100 3-5 分鐘。

            

            • 用 PBS 洗滌細胞。

            

            • 用 ~100 μl 封閉溶液(PBS 中的 1% BSA)20 分鐘。

            

            • 用 PBS 洗滌細胞。

            

            3、染色

            

            • 使用抽吸裝置從通道中取出所有液體。不要讓通道變干。

            

            • 吸液后立即加入 30 μl Alexa Fluor® 488 鬼筆環(huán)肽(在 200 μl PBS 和 1% BSA 中)。用 1 毫升注射器注射溶液會有所幫助。在室溫下孵育 20 分鐘。

            

            • 用 PBS 洗滌細胞。

            

            • 用 30 μl DAPI (0.1 μg/ml) 3-5 分鐘。

            

            • 用 PBS 清洗細胞并應用 ibidi 封固培養(yǎng)基,直到通道被填滿(約 50 μl)。ibidi 封固劑以甘油為基礎,并含有用于抗褪色的 DABCO。載玻片可存放約4 周。

            

            4、成像

            

            在熒光顯微鏡下選擇適當?shù)臑V鏡,也可以使用浸油觀察細胞。  

            

          fc21f585fc9c29df0cf03f96113fa4ce.png

            

            之所能如此簡便完成免疫熒光實驗,是因為這些ibidi培養(yǎng)皿和載玻片的底部為特殊處理的材質,絕大多數(shù)細胞可以直接貼壁生長,而不需要另外包被。同時,這些耗材的底部薄如蓋玻片,可以直接使用倒置顯微鏡進行觀察,得到高質量的成像,適用于顯微鏡比如共聚焦顯微鏡。

            

            實驗例子:

            

            超分辨率顯微鏡 (STED)觀察肌動蛋白細胞骨架

            

            μ-Slide VI 0.4與超分辨率顯微鏡方法兼容,使用 LifeAct-TagGFP2 蛋白,可以詳細觀察肌動蛋白細胞骨架。在這個實驗中,固定的 Rat1 成纖維細胞與 LifeAct-TagGFP2 蛋白一起在 μ-Slide VI 0.4,ibiTreat中孵育。并用 STED 顯微鏡以創(chuàng)建超分辨率圖像。  

            

          7089c91201fa7622d4de280361b2f26f.jpg

            

            使用LifeAct-TagGFP2 蛋白對 Rat1 成纖維細胞中的肌動蛋白細胞骨架進行超分辨率顯微鏡檢查。使用 Plan-Neofluar 100x/1.4 物鏡在 STEDYCON 超分辨率 STED 納米顯微鏡系統(tǒng)(Abberior Instruments GmbH,德國哥廷根)上進行顯微鏡檢查。

            

            μ-Slide VI 0.4用于獲取人 BJ 成纖維細胞的共聚焦圖像。用 Drp-1 siRNA 轉染細胞并用 MitoTracker Red 染色以觀察融合的線粒體。在 ibidi μ-Slide VI 0.4中培養(yǎng)的人 BJ 成纖維細胞的共聚焦顯微鏡圖像。MitoTracker Red(紅色)用于可視化線粒體。

            

          87fca11e190f57f70c2e6bb4a931cb5f.jpg

          聯(lián)


          久久精品伊人_国产精自产拍久久久久久_亚洲天堂成人av_亚洲第一网色综合久久红第一_来一水AV@lysav
          1. <p id="o6a8g"><tr id="o6a8g"><label id="o6a8g"></label></tr></p>

            1. <td id="o6a8g"><tr id="o6a8g"><label id="o6a8g"></label></tr></td>
              <td id="o6a8g"><tr id="o6a8g"><th id="o6a8g"></th></tr></td>

              <small id="o6a8g"><dl id="o6a8g"><small id="o6a8g"></small></dl></small>

                1. 张家界市| 新绛县| 平昌县| 兰考县| 平罗县| 通道| 肥乡县| 杭锦后旗| 达日县| 辰溪县| 泗水县| 河津市| 桂东县| 杭锦旗| 大渡口区| 巴林左旗| 东海县| 如皋市| 宁津县| 栖霞市| 无锡市| 海晏县| 大冶市| 图木舒克市| 灵石县| 革吉县| 化德县| 珠海市| 凭祥市| 维西| 禄丰县| 黔西县| 青川县| 湘潭市| 霞浦县| 武宁县| 娱乐| 历史| 德州市| 龙门县| 仙桃市|